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简单高效!新一代固相金属离子亲和填料问世!

发布时间:2019-10-17        内容来源:月旭科技

什么是磷酸化蛋白质

蛋白质磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基团(P04)转移到不同种类的氨基酸上(主要包括丝氨酸S、苏氨酸T、酪氨酸Y),从而使蛋白质发生翻译后修饰的过程。该修饰是蛋白质翻译后修饰(PTM)中最为重要的形式,具有显著的生物学功能,细胞增殖和凋亡,良性发育,信号转导,新陈代谢,肿瘤发生等过程都有磷酸化蛋白质的插足,研究磷酸化蛋白质对探究生物学病变机理有着非常重要的意义。


富集磷酸化蛋白质重要性

磷酸化蛋白质具有低丰度和高动态性的特点,因此对磷酸化蛋白质组学研究首先需要对磷酸化蛋白样品进行富集,降低样品复杂程度和提高磷酸化位点鉴定数目。固相金属离子亲和色谱法(IMAC)是磷酸化蛋白质组学研究中最常用的磷酸化蛋白质富集技术之一。


Welchrom® Ti Poss (phosphate ester)

固相金属离子亲和填料

Welchrom® Ti Poss (phosphate ester) 是月旭科技推出的的新一代固相金属离子亲和填料,金属离子Ti⁴⁺鳌合在磷酸酯 (phosphate ester) 为配基的多级孔杂化整体材料上形成的亲和填料,利用磷酸化基团与固相化的Ti⁴⁺的高亲和力来富集磷酸化蛋白质。磷酸化蛋白质上的磷酸基团中的三个氧原子分别与富集材料上的三个不同Ti⁴⁺螯合以形成稳定的八面体形的配位结构,这种配位方式提供了良好的结合能力。该填料具有吸附量大、选择性好、成本低、适用范围广、操作简单特点


规格参数

基架名称

多面体低聚倍硅氧烷(POSS)作为单体所制备的多级孔杂化整体材料

粒径范围

几十微米至几百微米

结合载量

63.6 mg/g

适用样品范围

所有含有磷酸基团的蛋白质和肽段

磷酸化肽段富集特异性

97%

pH稳定性

强酸、强碱下均可使用

化学稳定性

常见有机溶剂下均可使用

保存条件

干燥状态下室温保存

通用性操作步骤

采用80% ACN/6% TFA水溶液作为富集溶液,这样可以在富集过程中,很大程度上避免疏水性非磷酸化肽段的吸附。去除上清溶液后,依次用洗涤溶液A(50% ACN/6% TFA/200 mMNaCl)和溶液B(30%ACN/0.1%TFA)进行洗涤,这样可以最大程度上洗去非特异性肽段。最后采用100 μL 10%(wt%)的氨水洗脱吸附在材料上的磷酸化肽段。



应用案例


(a)β-酪蛋白酶解液直接进行分析的 MALDI TOF-MS谱图和(b)Welchrom® Ti Poss材料富集后分析的MADLI TOF-MS谱图


实验条件:0.1µg β-酪蛋白酶解液;采用80% ACN/6% TFA水溶液作为富集溶液,去除上清溶液后,依次用洗涤溶液A(50% ACN/6% TFA/200 mM NaCl)和溶液B(30%ACN/0.1%TFA)进行洗涤,最后采用100 μL 10%(wt%)的氨水洗脱吸附在材料上的磷酸化肽段。


图a中,未经过富集的β-酪蛋白酶解液样品MALDI谱图中,非磷酸化肽段的质谱信号峰非常强,严重影响了对磷酸化肽段的辨别。而经过Ti⁴⁺-IMAC富集,从MADLI谱图中(图b)可以清晰的看到磷酸化肽段以及其去磷酸化肽段的信号峰,而且几乎没有出现任何非磷酸化肽段的信号峰。证实了Welchrom® Ti Poss富集对磷酸化肽段具有良好的富集能力。


产品名称

规格

货号

Welchrom® Ti Poss (phosphate ester)

250mg

ATI001


各位小伙伴想了解更多有关固相金属亲和填料的相关信息,请咨询月旭当地销售人员或拨打400-810-6969垂询。


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